【摘要】 本发明涉及检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法，包括以下步骤：(1)白果蛋白提取：取白果1kg，经冻干处理后研磨，加入5～7倍体积石油醚脱脂，用pH 8.5，0.15mol/LTris-HCl溶液提取白果蛋白，经冷冻离心后得到蛋白上清液，经过40％-80％饱和度的硫酸铵沉淀，再次冷冻离心，得到沉淀用0.01mol/L、pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，并用所述磷酸盐缓冲液进行透析，透析完全后，冷冻干燥，得到白果蛋白提取物；所述白果蛋白提取物用上述磷酸盐缓冲液溶解，得到白果蛋白提取物溶液；(2)鼠源过敏原特异性抗体IgE的制备(3)双抗体夹心ELISA方法检测白果过敏蛋白。本发明能筛选白果及其制品中过敏蛋白。 【专利类型】发明申请 【申请人】南京林业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】210037 江苏省南京市龙蟠路159号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】鼓楼区 【申请号】CN201010238892.0 【申请日】2010-07-28 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101936999A 【公开公告日】2011-01-05 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101936999B 【授权公告日】2013-07-17 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】G01N33/68; G01N1/28; G01N33/531 【发明人】吴彩娥; 曹福亮; 范龚健; 李婷婷; 李莹莹 【主权项内容】一种检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于包括以下步骤：(1)白果蛋白提取取白果1kg，经冻干处理后研磨，加入5～7倍体积石油醚脱脂，用pH 8.5，0.15mol/LTris‑HCl溶液提取白果蛋白，经冷冻离心后得到蛋白上清液，经过40％‑80％饱和度的硫酸铵沉淀，再次冷冻离心，得到沉淀用0.01mol/L、pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，并用所述磷酸盐缓冲液进行透析，透析完全后，冷冻干燥，得到白果蛋白提取物；所述白果蛋白提取物用上述磷酸盐缓冲液溶解，得到白果蛋白提取物溶液；(2)鼠源过敏原特异性抗体IgE的制备小鼠经100mg/ml白果蛋白提取物溶液经口灌胃致敏、200mg/ml白果蛋白提取物溶液腹腔注射激发，激发后1h小鼠眼眶取血，分离小鼠抗血清，从小鼠抗血清中分离得到鼠源过敏原特异性抗体IgE；(3)白果过敏蛋白的检测将鼠源过敏原特异性抗体IgE固定在载体上；加入待测样本，使其中可能存在的过敏原与鼠源过敏原特异性抗体IgE结合，形成结合物；再加入酶标记二抗，使其与鼠源过敏原特异性抗体IgE结合成为复合物；最后显色剂显色，根据颜色变化判定样本中过敏蛋白的存在与否及过敏蛋白浓度。 【当前权利人】中农康正技术服务有限公司 【当前专利权人地址】江苏省扬州市高邮市高邮经济开发区洞庭湖路66号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12320000466006885L 【引证次数】4.0 【被引证次数】6 【他引次数】4.0 【被他引次数】6.0 【家族引证次数】4.0 【家族被引证次数】6

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