【摘要】 本发明涉及野生茄子耐盐基因StP5CS植物表达载体，属于分子生物学领域。以野生茄子叶片cDNA为模板，克隆StP5CS并连接到载体pMD19-T。改造pCAMBIA1301和pBI220.6载体，得到中间载体pCAMBIA1301-BI220。BamH I和Sma I双酶切StP5CS和改造的中间载体pCAMBIA1301-BI220，回收并连接酶切产物，得到最终的植物表达载体pCAMBIA1301-BI220-StP5CS。将该植物表达载体用于作物遗传转化，StP5CS在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成脯氨酸生物合成关键酶，植物体内积累脯氨酸，提高植物耐盐性。。 （，） 【专利类型】发明申请 【申请人】南京农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】210095 江苏省南京市卫岗1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010501799.4 【申请日】2010-10-11 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101955971A 【公开公告日】2011-01-26 【公开公告年份】2011 【IPC分类号】C12N15/82; C12N15/52; C12N15/66; A01H5/00 【发明人】朱月林; 盖钧镒; 张功臣; 杨立飞 【主权项内容】野生茄子耐盐基因StP5CS植物表达载体，其构建方法包括：1)野生茄子耐盐基因StP5CS的克隆以提取的野生茄子幼嫩叶片为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，设计引物扩增StP5CS，上游引物ZHPs：5′‑CACATTTCTGCTCCTACATT‑3′下游引物ZHPa：5′‑CTTCCTAAATACACAACTGGAT‑3′以反转录的cDNA为模板，进行聚合酶链式反应PCR，产物连接到pMD19‑T载体，转化TOP10感受态细胞，进行序列测定；2)中间载体pCAMBIA1301‑BI220的改造Hind III和EcoR I双酶切载体pCAMBIA1301和pBI220.6，回收pCAMBIA1301的大片段和pBI220.6的小片段，按体积1∶4的比例用T4DNA连接酶连接，得到中间载体pCAMBIA1301‑BI220，产物转化TOP10感受态细胞，提取质粒，进行酶切验证；3)植物表达载体pCAMBIA1301‑BI220‑StP5CS的构建设计引物以野生茄子cDNA为模板，用高保真酶进行PCR反应，在StP5CS的上游和下游分别引入BamH I和Sma I酶切位点，上游引物ZHPMBs 1：5′‑CGCGGATCCCACATTTCTGCTCCTACATT‑3′下游引物ZHPMSa1：5′‑TCCCCCGGGCTTCCTAAATACACAACTGGAT‑3′用BamH I和Sma I双酶切PCR产物和pCAMBIA1301‑BI220质粒，回收酶切产物，用T4DNA连接酶连接，连接产物转化TOP10感受态细胞，提取质粒，进行酶切验证，植物表达载体pCAMBIA1301‑BI220‑StP5CS构建成功。 【当前权利人】南京农业大学 【当前专利权人地址】江苏省南京市卫岗1号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000466007562R 【被引证次数】1 【被他引次数】1.0 【家族被引证次数】1

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