【摘要】 一株产精氨酸脱亚胺酶(ADI)的重组菌的构建及其定向改造方法，属于医药生物工程技术领域。其中包括：采用PCR方法，扩增变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)CGMCC No.2039的ADI编码基因arcA，构建ADI重组表达菌种，对该重组ADI酶进行酶学性质研究，其Km为2.88mmol/L(pH6.0)，最适反应pH为6.0，比酶活为20.85U/mg，当pH升高至生理pH(7.4)时，比酶活下降超过90%。采用易错PCR突变技术，对该重组ADI酶进行定向改造以提高其在生理中性条件pH下的活性及底物亲和力。通过一轮定向改造，筛选获得一株优良的突变株ADIM314，ADIM314酶和野生酶相比：其生理pH条件下比酶活提高20倍以上，Km值下降至0.65mmol/L(pH7.4)，最适反应pH从6.0提高至6.5。 【专利类型】发明申请 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201010572851.5 【申请日】2010-12-05 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102061283A 【公开公告日】2011-05-18 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN102061283B 【授权公告日】2012-08-22 【授权公告年份】2012.0 【发明人】倪晔; 孙志浩; 郑璞 【主权项内容】一种产精氨酸脱亚胺酶的重组菌的构建方法，其特征在于：(1)由产精氨酸脱亚胺酶ADI的变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)CGMCC No.2039，扩增ADI的编码基因arcA；(2)将arcA基因连接在表达质粒pET24a上，酶切位点为Nde I及Xho I，获得重组质粒pET24a‑ADI；(3)将重组质粒pET24a‑ADI转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得产ADI的大肠杆菌重组菌；该重组菌产生的重组ADI基因全长1254bp，编码417个氨基酸，蛋白质分子量为92.6kDa，由两个相同的亚基组成。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【被引证次数】17 【被他引次数】13.0 【家族被引证次数】17

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