【摘要】 罗丹明B的免疫亲和柱-高效液相-质谱联用检测方法，属于免疫学检测技术领域。本发明以抗罗丹明B的抗体与四甲氧基硅烷(TMOS)偶联包埋于层析柱中，通过吸附、洗脱达到样品净化的效果，再进行高效液相-质谱联用检测。本发明方法可以简化罗丹明B残留检测的样品处理过程，同时可达到净化浓缩的效果，成本低廉，快速，便携。 【专利类型】发明申请 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201010600992.3 【申请日】2010-12-23 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102087278A 【公开公告日】2011-06-08 【公开公告年份】2011 【IPC分类号】G01N33/53; G01N30/72; G01N30/14 【发明人】王利兵; 胥传来; 宋珊珊; 林菲; 赵书阁; 刘微波; 赵媛 【主权项内容】1.一种罗丹明B的免疫亲和柱-高效液相-质谱联用检测方法，其特征在于以抗罗丹明B的抗体与四甲氧基硅烷TMOS偶联包埋于层析柱中，通过吸附、洗脱达到样品净化的效果，最后通过高效液相-质谱联用检测； A、罗丹明B的免疫亲和柱的制备，步骤为： (1)取0.2mL的0.04mol/L HCl溶液，0.75mL的去离子水，3.4mL的四甲氧基硅烷TMOS混匀，4℃保存2-3min；取出，超声粉碎30min； (2)取一质量已知的烧杯，吸取20μL罗丹明B抗体，用pH7.4、0.01mol/L PBS稀释至1mL，得罗丹明B抗体溶液，4℃保存； (3)取步骤(1)超声完全后的混合液，吸取其中1mL试样，加入罗丹明B抗体溶液中，混匀，使之凝胶； (4)待凝胶结束后，烧杯称重，置于37℃恒温烘箱凝胶老化，待凝胶失去初重的50%时，老化过程结束，将1g老化后的凝胶研磨粉碎，装柱； (5)待柱中凝胶沉积稳定后，用5mL pH7.4、0.01mol/L的PBS预淋洗，洗去未包埋的罗丹明B抗体和其他干扰杂质，最后用5mL pH7.4、0.01mol/L的PBS平衡，即制得罗丹明B的免疫亲和柱； B、罗丹明B的免疫亲和柱的吸附、洗脱： 平衡：10mL pH7.4、0.01mol/L的PBS； 上样：待测的样品溶液； 洗涤：用5mL pH7.4、0.01mol/L的PBS洗涤，再用5mL超纯水洗涤； 洗脱：5mL甲醇洗脱，收集洗脱液待测； C、高效液相-质谱联用检测，步骤为： (1)以一定水平的罗丹明B加入辣椒粉样品中，在室温下至少静置15 min； (2)取上述添加罗丹明B的辣椒粉样品1g，加入10mL含体积百分20%丙酮的正己烷，震摇10 min，静置、过滤使分离出上层清液，残渣加入10mL含体积百分20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀； (3)移取提取液于氮吹仪上吹干，用0.01M PBS重溶，吹干后的样品用0.01M PBS以质量计稀释10倍； (4)用10mL 0.01M PBS平衡免疫亲和柱； (5)加样，用5mL 0.01M PBS洗涤，再用5mL超纯水洗涤，洗去未吸附样品； (6)5mL甲醇溶液洗脱柱上样品，收集洗脱液； (7)洗脱液经0.22 μm孔径的聚四氟乙烯膜过滤后进行高效液相-质谱联用检测。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【引证次数】2.0 【被引证次数】3 【他引次数】2.0 【被他引次数】3.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】3

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