【摘要】 一种碱性橙Ⅱ人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以对氨基苯丁酸及间苯二胺为原料，通过重氮化法制备碱性橙Ⅱ-丁酸人工半抗原，用碳二亚胺法将其与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，制得碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物，用分光光度法测定偶联物的偶联比。试验结果表明我们制得碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物产生了针对碱性橙Ⅱ很好的抗体，即是碱性橙Ⅱ人工抗原。本发明成功合成了碱性橙Ⅱ人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析当中，为以后人们的研究提供了必需的碱性橙Ⅱ人工抗原，可以满足国内对其研究的需要。。： 【专利类型】发明申请 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201010600988.7 【申请日】2010-12-23 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102120765A 【公开公告日】2011-07-13 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN102120765B 【授权公告日】2013-04-03 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】C07K14/76; G01N21/31 【发明人】匡华; 胥传来; 宋珊珊; 林菲; 赵书阁; 刘微波; 赵媛; 王利兵 【主权项内容】1.一种碱性橙Ⅱ人工抗原的合成方法，其特征在于以对氨基苯丁酸及间苯二胺为原料，通过重氮化法制备人工半抗原，用碳二亚胺法将人工半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比，制得碱性橙Ⅱ人工抗原，步骤为： (1)人工半抗原的制备 A液：将50mg对氨基苯丁酸溶于2mL无水乙醇，调pH 1～2，加亚硝酸钠溶液，直到反应液取样使淀粉碘化钾试纸变蓝，继续反应1h； B液：间苯二胺35mg溶于2mL无水乙醇，制得B液； 将A液逐滴加入B液中，反应过程保持pH 8～9，反应3h制得碱性橙Ⅱ-丁酸人工半抗原； (2)人工抗原的制备 C液：碱性橙Ⅱ-丁酸人工半抗原8mg，6 mg 碳二亚胺，4mg N-N琥珀酰酐NHS溶于2 mL 0.01M 磷酸盐缓冲液PBS中，磁力搅拌3 h； D液：20mg BSA溶于0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液中，4℃下保存待用； 冰浴条件下将C液逐滴加入D液中，然后置4℃下冰孵3h，制得碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物混合液，即是碱性橙Ⅱ人工抗原混合液； 透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用； 将碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物混合液移入透析袋中，用每次2L的0.01M的PBS溶液透析2次，再用每次2L的去离子水透析2次，共透析3天；最后冷冻干燥透析袋中的液体制成粉末，制得到碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物，即是碱性橙Ⅱ人工抗原； (3)人工抗原的鉴定：碱性橙Ⅱ人工抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。 微信 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【被引证次数】1 【被自引次数】1.0 【家族被引证次数】1

未经允许不得转载：http://www.zhongzhencnc.com/1781992764.html