【摘要】 一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问题。方法：一、构建单价载体；二、制备两边带有EcoR I粘末端的35S－A－Tnos片段；三、制备两边带有EcoR I粘末端的开环B/pROK II；四、将步骤二和三得到的基因片段进行酶连接。通用引物为P35S－S1和Tnos－A1。本发明方法与目前构建pROKII双价载体的方法相比较，减少了连接和转化的次数具有步骤少、操作简单、构建周期短和不必更换酶切位点的优点，能够明显地提高工作效率。 【专利类型】发明申请 【申请人】东北林业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号 【申请人地区】中国 【申请人城市】哈尔滨市 【申请人区县】香坊区 【申请号】CN200810064790.4 【申请日】2008-06-23 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101294165A 【公开公告日】2008-10-29 【公开公告年份】2008 【授权公告号】CN101294165B 【授权公告日】2011-04-27 【授权公告年份】2011.0 【IPC分类号】C12N15/82; C12N15/11; C12N15/66 【发明人】许志茹; 王柏臣; 刘关君; 刘昌财; 刘明坤; 魏志刚; 刘桂丰; 杨传平 【主权项内容】1、一种构建pROK？II植物双价表达载体的方法，其特征在于构建pROK II植物双价表达载体的方法按以下步骤实现：一、分别构建单价载体A/pROK II和B/pROK？II；二、以单价A/pROK？II质粒为模板、以P35S-S1和Tnos-A1 为引物进行PCR，PCR产物再用EcoR？I酶切，得到两边带有EcoR？I粘末端的 35S-A-Tnos片段；三、EcoR？I酶切单价载体B/pROK？II，得到两边带有EcoR I粘末端的开环B/pROK？II；四、将步骤二和步骤三得到的基因片段进行酶连 接，即得到pROK？II植物双价表达载体；步骤二中通用引物P35S-S1序列为 5’-GGCGAATTCCTGCAGGTCCCCAGATTAGCC-3’，通用引物Tnos-A1序列 为5’GGCGAATTCCCGATCTAGTAACATAGATGAC-3’。 【当前权利人】东北林业大学 【当前专利权人地址】黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】121000004240062542

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