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一种克隆多拷贝T-DNA旁侧植物DNA序列的方法专利

时间:2026-05-30    作者:admin 点击: ( 0 ) 次

【摘要】 本发明公开了一种可有效克隆含多拷贝T-DNA遗传修饰植物中T-DNA旁侧植物DNA序列的方法。本发明的主要步骤是用限制性内切酶切去除与植物DNA相连的部分T-DNA序列以外的其它T-DNA序列,然后进行2轮TAIL-PCR。酶切位点位于T-DNA上的NOS poly A区或/和35S poly A区,TAIL-PCR所用嵌套引物也是根据T-DNA上的NOS poly A区和35Spoly A区的序列设计,因此本方法具有通用性。 【专利类型】发明申请 【申请人】东北林业大学; 景天忠; 王志英 【申请人类型】个人,学校 【申请人地址】150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号 【申请人地区】中国 【申请人城市】哈尔滨市 【申请人区县】香坊区 【申请号】CN200810064648.X 【申请日】2008-06-02 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101285084A 【公开公告日】2008-10-15 【公开公告年份】2008 【授权公告号】CN101285084B 【授权公告日】2011-08-17 【授权公告年份】2011.0 【IPC分类号】C12P19/34; C12N15/10; C12P19/00 【发明人】景天忠; 王志英; 齐凤慧 【主权项内容】1、一种克隆转基因植物中多拷贝T-DNA旁侧植物DNA序列方法,包括以下步骤: (1)常规方法提取转基因植物基因组DNA。 (2)对步骤1中所述的DNA进行酶切反应。 (3)常规方法将步骤(2)中所述的酶切产物分离为两部分,回收大于5kb的片段部分。 (4)以步骤(3)中所述的回收片段为模板,进行TAIL-PCR扩增2轮。 (5)按常规方法纯化、克隆步骤(4)中所述的TAIL-PCR产物。使用PCR法筛选阳性 克隆后常规方法进行测序,得到T-DNA旁侧的植物DNA序列。 【当前权利人】东北林业大学; 景天忠; 王志英 【当前专利权人地址】黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号; ; 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】121000004240062542 【被引证次数】3 【被他引次数】3.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】3

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